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ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒,裸鼠ELISA試劑盒,倉(cāng)鼠ELISA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)品,培養(yǎng)基和生物試劑等

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產(chǎn)品分類/CLASS

ELISA試劑盒

酶聯(lián)免疫試劑盒

人ELISA試劑盒

進(jìn)口血清

抗體

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Sigma試劑

Amresco試劑

食品檢測(cè)試劑盒

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大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)技術(shù)文獻(xiàn)

點(diǎn)擊次數(shù):13458   發(fā)布時(shí)間:2012/11/1 14:16:10

大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)酶聯(lián)免疫檢測(cè)

         試劑盒使用說(shuō)明書(shū)           AE90735Ra

使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。酶聯(lián)免疫試劑盒是基于抗體夾心技術(shù)原理,來(lái)檢測(cè)大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

    用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)測(cè)定。

工作原理

本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA)測(cè)定樣品中大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)水平。向預(yù)先包被了大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗S100B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠S100鈣結(jié)合蛋白(S100B)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說(shuō)明書(shū)

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品6400pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標(biāo)記的抗S100B抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

需要而未提供的試劑和器材

 

1. 37恒溫箱。

2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

 

注意事項(xiàng)

 

1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差

3. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

4. 免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

6. 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

 

洗板方法

 

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

 

自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

 

 

 

標(biāo)本要求 

 

1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

 

操作程序

 

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)

3200 pg/ml

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1600 pg/ml

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

800 pg/ml

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

400 pg/ml

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

200 pg/ml

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

2. 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3. 加樣:1)空白孔,空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗S100B抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測(cè)樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗S100B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 

7. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

8. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

9. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。

 

 

操作程序總結(jié):

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

檢測(cè)范圍:50pg/ml3200 pg/ml。

保存:2-8。

有效期:6個(gè)月(2-8℃)

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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