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最新ELISA試劑盒研發(fā)/生產(chǎn)要求公布

點(diǎn)擊次數(shù):13248   發(fā)布時(shí)間:2014/9/15 10:02:28

    試劑盒的優(yōu)勢(shì)主要體現(xiàn)在了超高的特異性、正確性、精確度等幾個(gè)方面,質(zhì)量及其優(yōu)點(diǎn)與研發(fā)生產(chǎn)有著密切的關(guān)系,下面一起隨上海恒遠(yuǎn)來(lái)看*新elisa試劑盒研發(fā)/生產(chǎn)要求公布。
    首先,我們先來(lái)為您對(duì)其特異性進(jìn)行一個(gè)具體的講解,其實(shí)特異性也就是指在PCR擴(kuò)增過(guò)程中,專一性地?cái)U(kuò)增目的片斷而非其他片斷的機(jī)能。PCR實(shí)驗(yàn)的敏捷度與特異性是一對(duì)此長(zhǎng)彼消的特性,這也決定我們實(shí)驗(yàn)體系調(diào)節(jié)實(shí)際就是找到適合實(shí)驗(yàn)的敏捷度與特異性的平衡點(diǎn)。
    模板、引物性 質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)前提的控制等均會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性。在PCR實(shí)驗(yàn)本身的敏捷度很高,且實(shí)驗(yàn)前提未充分優(yōu)化的情況,通常會(huì)在目的片斷泛起的同時(shí)伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象。近年來(lái)的研究結(jié)果表明,緩沖液的品質(zhì)對(duì)保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過(guò)反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)SO4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),明顯進(jìn)步了PCR擴(kuò)增的特異性,降低背景。因?yàn)镻CR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜。
    
    在優(yōu)化免疫學(xué)反應(yīng)前提后,建立了克百威間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法和直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法,檢測(cè)限分別為0.005mg/L和0.01mg/L,檢測(cè)線性范圍分別為0.005~10mg/L和0.01~10mg/L,并在此基礎(chǔ)上研制了兩種用于檢測(cè)水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒,其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好,批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0%,試劑盒檢測(cè)的正確度高,除嘔吐物樣品外,其余樣品的回收率均在89.62%以上。
    ELISA試劑盒研發(fā)以2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原,6—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得高效價(jià)、高特異性的抗克百威多克隆抗血清,用間接ELISA測(cè)定效價(jià)為1:16000~1:128000,純化抗體效價(jià)為1:500000~1:4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體,同時(shí)了測(cè)定了酶標(biāo)抗體的活性,效價(jià)為1:4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19%,與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00%,與供試的其它5種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均小于0.44%,對(duì)于三種有機(jī)磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于0.12%。 同時(shí),根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理,進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對(duì)小鼠克百威中毒后的解毒作用,試驗(yàn)結(jié)果表明,抗體可以較好地緩解克百威對(duì)乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀,使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時(shí)將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原,并用紫外光譜法測(cè)定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。
    
    試劑盒檢測(cè)限為0.04μg/kg,樣本添加回收率為69.4%~107.5%,批內(nèi)變異系數(shù)為7.8%~14.6%,批間變異系數(shù)為10.9%~16.5%。分別利用戊二酸酐法和碳化二亞胺法合成半抗原和免疫抗原免疫動(dòng)物,制備特異性強(qiáng)的單克隆抗體。與儀器分析技術(shù)比擬具有使用利便、高敏捷度等特點(diǎn),可在硝基咪唑類藥物的殘留量檢測(cè)中施展重要作用。本實(shí)用新型涉及一種硝基咪唑類藥物殘留量檢測(cè)的酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒。該試劑盒組成包括:96孔酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗工作液、硝基咪唑類藥物抗體工作液、硝基咪唑類藥物7個(gè)濃度的尺度品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液。該方法的建立為硝基咪唑類藥物殘留的檢測(cè)提供了便捷、正確的分析檢測(cè)手段。在篩選硝基咪唑類單克隆抗體的基礎(chǔ)上,建立ELISA檢測(cè)方法,并研制出對(duì)雞肉中硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)試劑盒。采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中含有的硝基咪唑類藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗硝基咪唑類藥物抗體,加入酶標(biāo)二抗后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與尺度曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中硝基咪唑類藥物的殘留量。
    以上就是ELISA試劑盒研發(fā)與生產(chǎn)的要求,上海恒遠(yuǎn)提供各種種屬試劑盒,嚴(yán)把產(chǎn)品質(zhì)量關(guān),致力提供優(yōu)質(zhì)、價(jià)位合理的科研產(chǎn)品,全面提升科研試劑的質(zhì)量,將有利于更好地保障科研結(jié)果。

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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