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腫瘤壞死因子ELISA試劑盒的細(xì)節(jié)處理

點擊次數(shù)：12933   發(fā)布時間：2014/9/18 9:55:03

     由于腫瘤壞死因子elisa試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。

    
·細(xì)胞裂解液的細(xì)節(jié)處理：
  1. 吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
  2. 收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
  3. 加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
  4. 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的。
  5. 4℃10000×g離心10min，除去細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
    
·腫瘤壞死因子ELISA試劑盒組織勻漿液的細(xì)節(jié)處理：
  1. 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
  2. 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分
  3. 將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。
  4. 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
        

原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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