一、質(zhì)控血清的使用 

    衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時(shí)，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開(kāi)展某項(xiàng)檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個(gè)月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控 血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長(zhǎng)期內(nèi)效價(jià)不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測(cè)作用。

 

    二、質(zhì)控血清的使用 

    衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心制備的乙肝標(biāo)志物質(zhì)控血清，可以在-20℃保持半年定值不變。冰凍狀態(tài)融化使用時(shí)，應(yīng)先混勻，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反復(fù)冰融或自行分裝。開(kāi)展某項(xiàng)檢驗(yàn)的室內(nèi)質(zhì)控工作需要的質(zhì)控血清，一般按3-6個(gè)月用量準(zhǔn)備。自制的不定值質(zhì)控血清，在一批質(zhì)控血清將用完之前，需準(zhǔn)備下一批質(zhì)控 血清。質(zhì)控血清要求性能穩(wěn)定，較長(zhǎng)期內(nèi)效價(jià)不變，其理化性質(zhì)應(yīng)與病人樣本相近，這樣才能有效地起到監(jiān)測(cè)作用。

 

    三、臨界值質(zhì)控血清

    質(zhì)控制血清分定值和未定值兩種。如只用一份質(zhì)控血清定值，一般定在正常值與異常值交界點(diǎn)上，定性測(cè)定時(shí)處于弱陽(yáng)性水平，稱(chēng)為臨界值。乙肝標(biāo)志物臨界值的制定，應(yīng)按臨床要求，為臨床提供統(tǒng)一的判斷弱陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。臨界值質(zhì)控血清可以作為試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品和 陰性對(duì)照品以外的第三個(gè)對(duì)照品，它可以靈敏地反映出試劑盒的檢出水平，確保弱陽(yáng)性反應(yīng)的標(biāo)本不漏檢。

 

    四、質(zhì)控血清的制備。

    每個(gè)實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的條件，選用臨床中心提供的質(zhì)控血清，或按以下方法自己制備。本室使用的質(zhì)控血清（以乙肝質(zhì)控血清為例）。

 

    1.收集新鮮的無(wú)溶血、無(wú)黃疸、無(wú)細(xì)菌污染的陽(yáng)性血清。

 

    2.56℃加熱10小時(shí)來(lái)活。

 

    3.離心或過(guò)濾除去沉淀。

 

    4.用10%的小牛血清或正常人血清（PBS緩沖液）將收集的血清稀釋至所需的濃度。如能用正常的人血清稀釋更好，因其成份更接近于檢測(cè)標(biāo)本。

 

    5.抽濾除菌。按一次使用的量分裝小安瓿，封口，20℃保存?zhèn)溆�。不可反�?fù)凍融。

 

    6.被檢物要求檢出的水平常被認(rèn)為是質(zhì)控血清應(yīng)選擇的水平。如果該試驗(yàn)還有其它要求，則應(yīng)加所要求濃度的質(zhì)控物。

 

    7.標(biāo)定含量。20-30次測(cè)定結(jié)果刪除>±2SD數(shù)據(jù)的均值作為靶值，并與已知定值血清對(duì)比測(cè)定。

 

    五、室內(nèi)質(zhì)量控制程序

    臨床檢驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果，每次或每天之間不可能沒(méi)有誤差。決定允許的誤差范圍，以臨床上不造成誤診與漏診為準(zhǔn)，通過(guò)以下步驟來(lái)確定質(zhì)控范圍。

 

    1.*佳條件下的測(cè)定誤差。

 

    2.已知值的血清在常規(guī)檢驗(yàn)條件下的誤差。

 

    3.未知值的血清在常規(guī)檢驗(yàn)條件下的誤差。

 

    4.臨床應(yīng)用的要求。對(duì)任何一個(gè)試驗(yàn)都應(yīng)確定一個(gè)允許的誤差范圍，前題是滿(mǎn)足臨床要求。如允許誤差定得過(guò)小，在臨床上不存在任何意義 ，但為了符合該規(guī)定卻要花費(fèi)很大人力、物力和時(shí)間。相反，如果將允許誤差定得過(guò)大，將使監(jiān)測(cè)系統(tǒng)察覺(jué)不到臨床上要求檢出的誤差，失去質(zhì)控的意義。

 

    六、*佳條件下已知值質(zhì)控血清變異（optimal conditions variance,簡(jiǎn)稱(chēng)OCV）的測(cè)定 

在本實(shí)驗(yàn)室*佳條件下（包括操作者、試劑、儀器等）檢測(cè)質(zhì)控血清20-30次，測(cè)得結(jié)果計(jì)算，求出該組數(shù)據(jù)的均值和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示該實(shí)驗(yàn)室的*佳工作質(zhì)量。

現(xiàn)舉例說(shuō)明HBsAg ELISA法檢測(cè)時(shí)OCV的測(cè)定。使用的質(zhì)控制血清為臨界血清，HBsAg濃度為5ng/ml。在該實(shí)驗(yàn)室中選擇素質(zhì)、操作 *熟練的技術(shù)員進(jìn)行認(rèn)真地專(zhuān)門(mén)測(cè)定，選用*佳的試劑盒，檢測(cè)之前，將恒箱、加樣器等認(rèn)真校正、調(diào)校正、調(diào)試，使用新的加樣吸頭等 ，即在*佳、*理想的條件下進(jìn)行檢測(cè)。除質(zhì)控血清外同時(shí)測(cè)定陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品。并作雙份測(cè)定，得出2個(gè)吸光值（A值），求出X。連續(xù)作20次，求出20個(gè)X，即X1……X20。從這20個(gè)數(shù)據(jù)中，求出OCV的X和SD。

 

    七、常規(guī)條件下已知值質(zhì)控血清變異（routine conditions variance-known value,簡(jiǎn)稱(chēng)RCVK）的測(cè)定。

做常規(guī)檢驗(yàn)的技術(shù)人員，在常規(guī)檢驗(yàn)的條件下，將質(zhì)控血清放在常規(guī)檢測(cè)樣本中，進(jìn)行 20次檢驗(yàn)，結(jié)果計(jì)算同OCV法。一般認(rèn)為RCV的SD在OCV的SD兩倍范圍內(nèi)可以接受。若太大應(yīng)該查找原因，使其向OCV的 SD值靠近。在改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室條件后（例如較正加樣器，糾正洗板操作，調(diào)正溫育溫度等），重新進(jìn)行RCVK的測(cè)定。如果RCVK的S D值更小，說(shuō)明OCV不是*佳條件下測(cè)定的，應(yīng)重新再測(cè)OCV。常規(guī)條件下，RCVK肯定要比OCV大。通過(guò)質(zhì)控控制各項(xiàng)條件， 使RCVK的數(shù)據(jù)盡可能接近OCV值。RCVK的數(shù)據(jù)反映該實(shí)驗(yàn)室日常工作的質(zhì)量，用于作質(zhì)控圖，對(duì)室內(nèi)檢驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行控制，每日檢驗(yàn)的結(jié)果，報(bào)告能否發(fā)出。

 

    八、常規(guī)條件下,未知值質(zhì)控血清變異(routine conditions variancl-unknown value 簡(jiǎn)稱(chēng)RCVU)的測(cè)定 。

有時(shí)為了避免主觀性,再作RCVU測(cè)定。測(cè)定步驟同 RCVK，但檢測(cè)的操作者不知質(zhì)控血清的定值，或在操作者不知哪份是質(zhì)控血汪清的條件下進(jìn)行常規(guī)檢驗(yàn)，以排除操作者的主觀性。在此不再舉例說(shuō)明。

 

    九、質(zhì)控圖 

通過(guò)以上三步驟，可以開(kāi)始作室內(nèi)質(zhì)控圖，根據(jù)RCVK的和SD作質(zhì)控框圖。利用質(zhì)控圖可以對(duì)每次檢驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行監(jiān)測(cè)，當(dāng)沒(méi)有更換另一批號(hào)試劑盒和另一批號(hào)質(zhì)控血清時(shí)，該質(zhì)控圖可以連續(xù)作下去。

 

    質(zhì)控血清的S/CO值低于-2SD的范圍，屬“告警”，應(yīng)尋找原因并在質(zhì)控圖上記錄查出的原因。

ELISA試驗(yàn)中，各種檢驗(yàn)項(xiàng)目的誤差允許范圍均有待在實(shí)踐中得出結(jié)論，以上只是舉例說(shuō)明質(zhì)控方法，不是定論。2SD是一般公認(rèn) 的允許誤差限度。每批測(cè)定放一份質(zhì)控血清時(shí)，一次超過(guò)2SD應(yīng)作為“告警”，二次超出2SD為“失控”。當(dāng)質(zhì)控過(guò)程中，出現(xiàn)失控時(shí)，出現(xiàn)失控時(shí)，應(yīng)查找原因，通常是試劑盒或質(zhì)控血清失效造成。更換試劑盒或更換質(zhì)控血清，找出原因糾正后重新檢驗(yàn)。如果檢驗(yàn)結(jié)果仍達(dá)不到要求或找不到原因時(shí)，應(yīng)重復(fù)進(jìn)行OCV的檢驗(yàn)。如果OCV檢驗(yàn)的結(jié)果仍是好的，說(shuō)明常規(guī)操作出現(xiàn)問(wèn)題。一般認(rèn)為：

 

    ①一次超出3SD；

 

    ②連續(xù)二次超出2SD；

 

    ③3-5次連續(xù)處于一側(cè)的2SD之內(nèi)；

 

    ④5～7次連續(xù)偏向橫軸的一側(cè)，均為失控。第③、④種情況，單獨(dú)依靠記錄往往是不易察覺(jué)的，但在質(zhì)控圖上可以清晰地發(fā)現(xiàn)這種失控。

 

    十、統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算方法—“即刻性”質(zhì)控 

    以上介紹的質(zhì)控方法基本上與臨床化學(xué)測(cè)定的質(zhì)控方法相同，但 ELISA有其特殊性，*合適的質(zhì)控方法尚待研究建立。有些實(shí)驗(yàn)室不是每天進(jìn)行ELISA項(xiàng)目的檢驗(yàn)，而ELSIA試劑盒效期短，用一批號(hào)試劑盒連續(xù)常規(guī)測(cè)20次，難度較大。采用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，只需連續(xù)測(cè)3次，即可對(duì)第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。“即刻法”的建立具體計(jì)算方法如下：

 

    1.先將測(cè)定值從小到大排列。

 

    2.計(jì)算X和SD。

 

    3.計(jì)算SDI上限和SDI下限值。

 

    4. 將SDI上限、SDI下限值與SDI值中的數(shù)字比較。

 

    當(dāng)SDI上限值和SDI下限值＜n2SD時(shí)，表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)往下測(cè)定，繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算；當(dāng)SDI上限和SDI下限有一值處于n2SD和n2SD值之間時(shí)，說(shuō)明該值在2SD～3SD范圍，處于“告警”狀態(tài)；當(dāng)SDI上限和SDI下限有一值＞n2SD時(shí)，說(shuō)明該值已在3SD范圍之外，屬“失控”。數(shù)值處于“告警”和“失控”狀態(tài)應(yīng)舍去，重新測(cè)定該項(xiàng)質(zhì)控血清和病人樣本。舍去的只是失控的這次數(shù)值，其他次測(cè)定值仍可繼續(xù)使用。

即刻性質(zhì)控統(tǒng)計(jì)方法，適于ELISA測(cè)定的質(zhì)控。

當(dāng)檢測(cè)的數(shù)值超過(guò)20次以后，不必再使用“即刻法”質(zhì)控統(tǒng)計(jì)計(jì)算，可以轉(zhuǎn)入常規(guī)的質(zhì)控圖的質(zhì)控。將前20次的數(shù)值求出的和SD作質(zhì)控框架圖，第21次的數(shù)值，依次點(diǎn)入即可。

 

    十一、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（external quality assessment,簡(jiǎn)稱(chēng)EQA） 

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)簡(jiǎn)稱(chēng)室間質(zhì)評(píng)，是由質(zhì)控中心采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果，并發(fā)現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性，了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異，并幫助校正，使具有可比性。各實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)結(jié)果報(bào)到質(zhì)控中心，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析，得出相互比較的結(jié)果。這種評(píng)價(jià)不能控制各實(shí)驗(yàn)室每天發(fā)出的檢驗(yàn)報(bào)告，而是一種回顧性評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)控主要監(jiān)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果的精密度，而室間質(zhì)評(píng)主要控制試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度，不能互相替代。參與質(zhì)評(píng)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先做好室內(nèi)質(zhì)控。

 

    十二、室間質(zhì)評(píng)的方法

    1. 發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查

    這是國(guó)內(nèi)外室間質(zhì)評(píng)的常用形式。部臨檢中心對(duì)乙肝標(biāo)志物ELISA檢驗(yàn)的室間質(zhì)評(píng)采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室，各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn)，并將檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)至部臨檢中心。部臨檢中心經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回各實(shí)驗(yàn)室。通過(guò)評(píng)價(jià)，各實(shí)驗(yàn)室了解本室工作質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)差距，并設(shè)法改進(jìn)，以不斷提高檢驗(yàn)質(zhì)量。

 

    這種評(píng)價(jià)方式有一定缺點(diǎn)，即各實(shí)驗(yàn)室常對(duì)質(zhì)控物特殊對(duì)待，在檢驗(yàn)時(shí)選用特殊試劑盒，選派特別的技術(shù)員進(jìn)行檢驗(yàn)，有的實(shí)驗(yàn)室互相核對(duì)結(jié)果并作修改。這就使EQA的結(jié)果不能反映該實(shí)驗(yàn)室日常工作水平。

 

    2.派觀察員到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行試劑調(diào)查

這種調(diào)查事先不通知，臨時(shí)派觀察員到實(shí)驗(yàn)室，指定采用常規(guī)方法，檢驗(yàn)規(guī)定的一組標(biāo)本，進(jìn)行評(píng)價(jià)。

    這種調(diào)查方式，容易發(fā)現(xiàn)該實(shí)驗(yàn)室存在的實(shí)際問(wèn)題，可以直接給予指導(dǎo)和幫助，解決問(wèn)題，提高檢驗(yàn)質(zhì)量。這種調(diào)查通�？梢允褂谜鎸�(shí)樣本，避免采用質(zhì)控物的一些缺點(diǎn)。