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腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)

閱讀次數(shù):1302   發(fā)布時(shí)間:2012/9/25 9:28:03

 

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
特殊之處在于成纖維細(xì)胞的排除(成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時(shí)混雜生長(zhǎng),致難以純化腫瘤組織)。有以下一些方法:
1.機(jī)械刮除法
2.反復(fù)帖壁法
3.消化排除法
4.膠原酶消化法
 
1) 機(jī)械刮除法
1.標(biāo)記:鏡下觀察,用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位。
2.刮除:棄掉培養(yǎng)液,把無(wú)菌膠刮伸入瓶皿中,肉眼或顯微鏡窺視下,刮除無(wú)標(biāo)記空間。
3.用Hanks液沖洗一兩次,洗除被刮掉的細(xì)胞。
4.注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留,可重復(fù)刮除至完全除掉為止。
 
2) 反復(fù)帖壁法
1.待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后,倒出舊培養(yǎng)液,用胰酶消化后,Hanks沖洗2次,加入不含血清的培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
2.取編號(hào)為A、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶。首先把懸液接種入A培養(yǎng)瓶中,置溫箱中靜止培養(yǎng)5~20分鐘后,輕輕傾斜培養(yǎng)瓶,讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液,再接種入B培養(yǎng)瓶中后,向A瓶中補(bǔ)充少許完全培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
3.培養(yǎng)B瓶中細(xì)胞5~20分鐘后,按處理A的方法,把培養(yǎng)液注入C培養(yǎng)瓶中,再向B瓶補(bǔ)加完全培養(yǎng)基。
 
3)消化排除法
1.先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養(yǎng)基細(xì)胞一次,然后再換成新的混合繼續(xù)消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,到半數(shù)細(xì)胞脫落下來(lái)后,便立即停止消化。
2.把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng),向原瓶?jī)?nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后,成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落,經(jīng)過幾次反復(fù)處理,可能把成纖維細(xì)胞除凈。
 
4)膠原酶消化法
1.可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后,即終止消化。
2.用Hanks洗滌處理一次后,更換新培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),可獲純凈腫瘤細(xì)胞。如成纖維細(xì)胞未被除凈,可再次重復(fù)。

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